分類

具體項目

詳細說明

試驗核心目的

1. 驗證滅菌工藝有效性

確認設定參數下，即使微生物處于 “最難滅菌位置"（如最冷點、氣體難穿透區(qū)）也能被殺滅。

2. 確認條件充分性

通過高抗性生物指示劑（BI）模擬 “最壞情況"，證明滅菌對所有產品   / 負載均可靠。

3. 支持驗證與再驗證

是滅菌器 IQ/OQ/PQ 驗證及周期性再驗證的核心組成部分。

核心工具：BI

1. 定義

含已知數量、特定抗性微生物孢子的載體（孢子條、安瓿瓶、濾紙片等），代表 “最難殺滅微生物"。

2. 菌種選擇（按滅菌方式）

- 濕熱滅菌：嗜熱脂肪芽孢桿菌
  - 干熱滅菌：枯草芽孢桿菌黑色變種
  - 環(huán)氧乙烷滅菌：枯草芽孢桿菌黑色變種 / 嗜熱脂肪芽孢桿菌
  - 輻照滅菌：嗜熱脂肪芽孢桿菌 / 短小芽孢桿菌

3. 關鍵參數

孢子數量：通常為 10?~10? CFU / 載體；需提供每批 BI 的 “活菌計數報告"，確保初始菌量準確。

BI 放置策略

1. 放置原則

模擬 “條件"，優(yōu)先覆蓋滅菌器 /   負載中 “最難滅菌位置"。

2. 典型放置點

- 滅菌器腔室：冷點（如排氣口附近、腔室角落）、氣流死角
  - 負載內部：包裝中心、密度最高區(qū)域、堆疊底層

3. 數量要求

單次試驗需放置多個 BI（通常≥3 個），覆蓋不同關鍵位置，避免 “單點誤判"。

試驗實操流程

1. 試驗準備

確認 BI 活性、滅菌器參數校準、負載模擬（與實際生產一致）。

2. 執(zhí)行滅菌

按設定參數（溫度 / 壓力 / 時間 / EO 濃度等）運行滅菌程序，過程中記錄關鍵參數（如腔室溫度、壓力曲線）。

3. 培養(yǎng)與對照設置

- 實驗組：取出滅菌后的 BI，按說明書培養(yǎng)（24~48 小時，視菌種而定）
  - 陽性對照：未經滅菌的 BI 同步培養(yǎng)（需生長良好，證明   BI 本身有效）
  - 陰性對照：無菌培養(yǎng)基同步培養(yǎng)（需無菌，排除污染干擾）

4. 結果判定

實驗組 BI 均為陰性（無菌生長）、陽性對照陽性、陰性對照陰性 → 試驗合格；反之則需排查滅菌參數、BI 放置等問題并重試。

試驗頻率要求

1. 驗證（PQ 階段）

必須執(zhí)行，作為滅菌工藝 “放行" 的核心依據。

2. 周期性再驗證

通常每年 1 次；若滅菌器經重大維修（如更換加熱管、密封件），需提前再驗證。

3. 變更后驗證

滅菌參數調整、負載類型 / 裝載方式改變、BI 批次更換后，需重新執(zhí)行試驗。

核心法規(guī)與標準

國際標準

-   ISO 17665（濕熱滅菌）
  - ISO 20857（干熱滅菌）
  - ISO 11135（環(huán)氧乙烷滅菌）
  - ISO 11137（輻射滅菌）

國內法規(guī)

- 《中國藥典》（無菌檢查法、滅菌方法驗證指導原則）
  - NMPA《醫(yī)療器械滅菌驗證指南》
  - GMP（藥品 / 醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)范）

國際監(jiān)管指南

FDA《滅菌工藝驗證指南》、EU GMP《無菌藥品生產指南》

核心目標：SAL

無菌保證水平要求

必須達到 SAL ≤ 10??（即每件物品滅菌后存活微生物的概率不超過百萬分之一），是試驗合格的核心指標。

濕熱滅菌（蒸汽）

嗜熱脂肪芽孢桿菌

溫度（121℃/132℃）、壓力、滅菌時間

37~40℃ 有氧培養(yǎng)

需確保蒸汽飽和度（≥95%），避免 “干飽和蒸汽" 導致滅菌失效。

干熱滅菌

枯草芽孢桿菌黑色變種

溫度（160~180℃）、恒溫時間

30~35℃   有氧培養(yǎng)

負載需均勻分布，避免堆疊過密導致 “局部溫度不足"。

環(huán)氧乙烷滅菌

枯草芽孢桿菌黑色變種

EO 濃度、溫度（37~55℃）、濕度、暴露時間

30~35℃ 有氧培養(yǎng)

需控制腔室濕度（40%~80%），濕度不足會降低 EO 殺菌效果；滅菌后需充分解析殘留 EO。

輻照滅菌

短小芽孢桿菌

輻照劑量（通常 25~50 kGy）

30~35℃   有氧培養(yǎng)

BI 需緊貼負載表面 / 內部，確保與產品接受相同劑量的輻照。